基于Tn5转座子的AcMNPV突变体文库的构建及初步分析.pdf

2019-08-08 08:02
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T10转座AcMNPV突变体文库的构建及初步分析
摘要
杆状病毒是一种生物杀虫剂和基因表达系统,在基因治疗中也很重要。
它可以发挥重要作用。
目前可获得杆状病毒基因组和关键基因的分子生物学。
有了一些了解,病毒基因组中的大多数基因尚未被研究过。
建立一个高效的访问栏。
突变病毒变体的方法对于推进病毒功能基因组学的研究非常重要。
在本研究中,我们使用AcMNPV杆状病毒模型作为研究对象,并首次应用基于随机易位的Tn5
该方法是构建杆状病毒变体文库。
Tn5是细菌转座子。
Tn5转座酶
在该动作下,可以使用两次重复的19bp来驱动基因之间的随机插入。
基因组DNA
从大片段插入基因序列破坏了原始基因组的结构和功能,这将导致表型
变化
在本文中,果蝇hsp70启动子促进绿色荧光蛋白的Tn5转座子表达。
转座子插入使用体外易位系统使用转座子载体表达在昆虫细胞和容易跟踪
在将Sf细胞转染到AcMNPV基因组中后,获得了表达绿色荧光蛋白的病毒变体文库。
使用PCR,Soutlem B10t等从突变体文库中纯化出两株A66G和A79G病毒株。
正确插入转座子并插入每个拷贝。
病毒复制动力学的比较分析
出芽病毒A79G明显早于野生型病毒和A66G。
简单的引物PCR方法
在转座子插入位点进行了初步分析,但确切的位点尚未确定。
该研究建立了一种建立基于转座子的杆状病毒突变体文库的方法。
更完美
特别地,一种用于分析变体病毒以确定变异病毒的插入位点的方法,其中必需基因已被改变
该方法将为杆状病毒的功能基因组学研究提供重要工具,例如基于菌株分离。
关键词:AcMNPv。Tn5转座子,转座酶
T T Tn5变成庄。
r的AcMNPV突变体文库的构建及初步分析
摘要
认为有效的昆虫诊断是必要的
杆状病毒表达
向量和向量里面向量。A /
基因工程
表征的功能
制作完成后
序列基因组
剩下的是未知的。
大多数功能
重要的是,thegenes
建立获得Willan重组病毒的方法
Evagen Play
国际病毒调查
重要的基因组学
用于施工
有了这种病毒
研究,AcMNPv,其物种
Arandomvector.Tn5isa
碱基突变体